腺病毒包裝

▏ 服務(wù)原理

腺病毒包裝技術(shù)主要原理是將目的片段克隆到腺病毒表達載體上，表達載體和包裝質(zhì)粒通過(guò)重組導入腺病毒包裝細胞進(jìn)行包裝，包裝好的病毒進(jìn)一步進(jìn)行擴增和滴度測定。

▏ 服務(wù)簡(jiǎn)介

腺病毒是一種線(xiàn)性雙鏈DNA病毒，由于其具有宿主范圍廣、可感染分裂和非分裂細胞、高滴度制備、外源基因裝載容量大等優(yōu)點(diǎn)，重組腺病毒已越來(lái)越廣泛地被應用于基礎研究和臨床試驗中，并成為世界上最常用的基因治療載體之一。

▏ 服務(wù)優(yōu)勢

可感染的細胞種類(lèi)多，宿主廣泛;
感染效率高，特別適合質(zhì)粒載體轉染效率低的細胞，如原代細胞、神經(jīng)細胞等，且目的蛋白表達水平高;
可包裝大片段的外源基因，高達10kb;
不整合到細胞染色體中，生物安全性高。

科佰生物擁有豐富的病毒包裝經(jīng)驗，成功為很多客戶(hù)包裝出需要的病毒。公司提供2種較常用的系統：AdEasy、AdMAX。

AdEasy系統：
AdEasy包裝系統主要的特點(diǎn)是利用Cre/loxP系統在大腸桿菌(BJ5183)中完成外源基因插入腺病毒基因組的過(guò)程，獲得環(huán)狀的重組腺病毒基因組，并且具有在細菌中復制的必需元件。將重組腺病毒基因組酶切線(xiàn)性化后轉染HEK293細胞，避免了雙質(zhì)粒共轉染得到重組腺病毒。

使用這個(gè)系統需要注意以下問(wèn)題：
1.要用能表達Cre重組酶的特定的大腸桿菌，建議建立菌種庫以免細菌發(fā)生變化;
2.由于重組是在細菌中發(fā)生的，微小的基因組變化不易發(fā)現;
3.要獲得高品質(zhì)的重組腺病毒毒種(高病毒產(chǎn)量、高目的基因表達)應挑選多個(gè)重組腺病毒質(zhì)粒，分別轉染HEK293細胞，獲得多個(gè)重組病毒來(lái)篩選。

可根據不同的研究需求構建腺病毒穿梭載體，如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過(guò)表達的腺病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的腺病毒載體等

AdMAX系統：
AdMax包裝系統是通過(guò)Cre/loxP 獲得重組病毒，這個(gè)過(guò)程發(fā)生在HEK293細胞中，從而避免在細菌中重組。將克隆了外源基因的腺病毒穿梭質(zhì)粒與攜帶了腺病毒大部分基因組的包裝質(zhì)粒共轉染HEK293細胞，利用Cre/loxP系統的作用實(shí)現重組，產(chǎn)生重組腺病毒。這個(gè)系統有多種優(yōu)勢，包括操作簡(jiǎn)便、重組效率高、獲得的病毒產(chǎn)率高、目的基因的表達水平高(因為mCMV啟動(dòng)子比hCMV啟動(dòng)子強若干倍)等。

可根據不同的研究需求構建腺病毒穿梭載體，如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過(guò)表達的腺病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的腺病毒載體等

▏ 服務(wù)流程

1）獲得目的基因序列;
2）構建病毒表達載體質(zhì)粒;
3）表達載體質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒重組;
4）感染HEK293，包裝出病毒;
5）病毒擴增、濃縮;
6）滴度測定。

▏ 服務(wù)說(shuō)明

1）客戶(hù)提供目的基因的序列，如果提供模板，請告知載體、酶切穩點(diǎn)等信息;
2）默認使用AdEasy系統，有明確要求請告知;
3）序列過(guò)長(cháng)可能影響病毒滴度;
4）目的蛋白的功能驗證另外收費。