熒光定量PCR檢測

▏ 服務(wù)原理及背景

實(shí)時(shí)熒光定量PCR在檢測體系中加入熒光基團，通過(guò)PCR 擴增反應中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時(shí)檢測，從而實(shí)現對起始模板的定量及定性分析。隨著(zhù)PCR反應的不斷進(jìn)行，帶熒光的PCR產(chǎn)物逐步累積，信號強度等比例增強。這樣，我們可以通過(guò)熒光信號的變化來(lái)實(shí)時(shí)監控PCR產(chǎn)物量的變化，得到一條擴增曲線(xiàn)。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴增曲線(xiàn)有基線(xiàn)期、指數期和平臺期各階段。
基線(xiàn)期，熒光信號基本為背景信號，無(wú)法辨別產(chǎn)物的熒光信號值；
指數期，熒光信號超過(guò)背景信號進(jìn)入指數增長(cháng)階段的閾值，此時(shí)循環(huán)數稱(chēng)為 Ct ( Cycle threshold) 值，PCR模板起始濃度的對數值與Ct呈線(xiàn)性關(guān)系。
平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數級的增加，最終的 PCR產(chǎn)物量不能計算出起始模板拷貝數。

▏ 檢測方法

定量方法包括絕對定量分析和相對定量分析，采用SYBR Green I法和Taqman探針?lè )ā?/span>
絕對定量分析：絕對定量法也稱(chēng)作標準曲線(xiàn)法，是一種利用已知的標準曲線(xiàn)來(lái)定量未知樣本目的模板起始量的方法。以 5-6 個(gè)點(diǎn)梯度稀釋所得的標準品（科佰可以提供大量驗證過(guò)的標準品）為模板，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 擴增，以目的模板初始拷貝數的對數為橫坐標，檢測到的 CT 值為縱坐標繪制標準曲線(xiàn)，得到線(xiàn)性回歸方程，將未知樣本的 CT值帶入該方程即可計算出目的模板的起始量。
相對定量分析：相對定量可分析某一靶基因在不同樣品之間、同一樣品的不同部位之間以及某一樣品的某一部位在不同動(dòng)態(tài)時(shí)期之間的 mRNA 水平上表達量的比值，也可分析靶基因與內參基因在同一樣品中拷貝數的比值。

▏ 應用領(lǐng)域

實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性強、快速高效的特點(diǎn)，廣泛應用于生物醫藥、臨床診斷、農業(yè)、環(huán)境科學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域，常用于檢測基因表達、基因變異、轉基因等。

▏ 服務(wù)流程

科佰生物已通過(guò)ISO9001和ISO13485雙體系認證，同時(shí)將按照CNAS體系要求來(lái)執行QPCR檢測的各流程，質(zhì)量有保證。

▏ 案例展示

案例一 新冠病毒（SARS-CoV-2）檢測
應用描述：qPCR被廣泛應用于新冠病毒的核酸檢測，作為診斷的金標準。
技術(shù)細節：針對病毒RNA的特定區域（如ORF1ab、N基因等）設計引物和探針，通過(guò)逆轉錄qPCR（RT-qPCR）檢測病毒RNA。
優(yōu)勢：高靈敏度、高特異性，可快速獲得檢測結果，支持大規模篩查。

案例二 轉基因作物檢測
應用描述：qPCR用于檢測食品或農產(chǎn)品中是否存在轉基因成分（如轉基因大豆、玉米）
技術(shù)細節：提取腫瘤組織RNA，逆轉錄為cDNA后，使用qPCR檢測特定基因的表達量。
優(yōu)勢：高精度定量，可用于個(gè)性化醫療和治療方案的優(yōu)化。

案例三 乳腺癌基因表達分析
應用描述：通過(guò)qPCR檢測乳腺癌相關(guān)基因（如BRCA1、HER2）的表達水平，評估患者的治療反應和預后。
技術(shù)細節：針對轉基因作物特定的外源基因序列（如35S啟動(dòng)子、NOS終止子）設計引物和探針，進(jìn)行定量檢測。
優(yōu)勢：快速、準確，滿(mǎn)足食品安全監管需求。

案例四 腸道菌群定量分析
應用描述：qPCR用于定量分析腸道微生物組中特定菌群的豐度（如乳酸菌、雙歧桿菌）
技術(shù)細節：設計菌群特異性的16S rRNA基因引物和探針，進(jìn)行定量檢測。
優(yōu)勢：高靈敏度，可精確分析微生物群落結構變化。

案例五 白血病BCR-ABL1標準品開(kāi)發(fā)
應用描述：qPCR用于定量分析比較不同占比的BCR-ABL1標準品
技術(shù)細節：設計BCR-ABL1的融合基因引物和探針，進(jìn)行定量檢測。
優(yōu)勢：高靈敏度，可精確分析低頻比例的變化。