引物探針

背景

分子診斷技術(shù)里，引物和探針是核心。引物是人工合成的寡核苷酸序列，作為核苷酸聚合起始的關(guān)鍵引導分子，其長(cháng)度一般在18到27個(gè)堿基對，這與 Tm 值及特異性有關(guān)，太長(cháng)（大于 38 個(gè)堿基對）會(huì )使延伸溫度超 74℃，超出 Taq DNA 聚合酶適宜反應溫度范圍，影響酶活性與 DNA 復制。

在PCR過(guò)程中，引物至關(guān)重要，是 DNA 聚合酶啟動(dòng)復制提供起點(diǎn)。一個(gè)引物與靶區域一端的模板鏈互補配對，另一個(gè)與另一端互補結合，為聚合酶指明起始位置。PCR 啟動(dòng)、溫度升高使 DNA 模板鏈解旋成單鏈后，引物依堿基互補配對原則與特定區域結合，DNA 聚合酶識別結合位點(diǎn)，從引物 3’端添加核苷酸，沿 5’到 3’端延伸新鏈，循環(huán)往復實(shí)現 DNA 片段指數級擴增，引物就像建高樓的基石，保障 PCR 高效推進(jìn)。

探針是帶標記核酸序列，靠分子雜交與目標核酸序列特異性結合，精準探測目標。是分子診斷關(guān)鍵''利器'',可為DNA或RNA序列，帶有如“信號燈”般的標記物。生物樣本核酸分子多，無(wú)標記時(shí)，探針與目標核酸結合的微弱信號易被淹沒(méi)。有標記物后，探針與目標序列結合，能通過(guò)放射性同位素自顯影、熒光染料發(fā)光或化學(xué)物質(zhì)顯色等發(fā)出易捕捉信號，助研究者了解目標核酸情況。

引物探針介紹